教学目的、要求:
掌握纸层析原理与技术,了解离子交换层析,离子交换纤维素层析,凝胶层析,亲和层析的基本原理与技术。
教学重点及难点:
层析的分类,分配层析法分离目的物质原理;难点是分配层析机理,吸附与解吸。
核心知识:
层析的种类:
根据分离原理不同:吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析。
根据流动相的不同:液相层析、气相层析。
根据支持物装填方式:柱层析、薄板层析、还有纸层析。
纸层析的机理 :纸层析是一种用滤纸作支持物,以纸上吸附的水为固定相的层
析方法。分配系数大的组分在纸上迁移的速度慢,分配系数小的速度快,最后不同的
组分可以完全分离。
Rf值:表示物质在纸上走的快慢,称作迁移率。
Rf=AC/AB
亲和层析:几乎所有的生物活性物质都存在与不溶性淀粉对淀粉酶亲和作用类似的现象,
如酶-底物、抗原-抗体、激素-受体、核酸中的互补链、多糖-蛋白复合体等。这种利
用生物大分子特异亲和力而设计的技术称为亲和层析。