教学目的、要求：

    掌握分子杂交的种类、样品膜的制备方法、探针标记类型、杂交核心

步骤；掌握DNA测序方法的种类、各自测序原理。

教学重点及难点：

    探针标记方法、不同杂交类型的意义、DNA和蛋白质杂交主要操作过程；双脱氧链终止法测序、化学降解法测序、自动化测序、基因芯片测序。

核心知识：

   1)  DNA和RNA的杂交

        制备DNA或RNA样品→与固定基质结合→80℃真空固定→预杂交→加入标记探针杂交→洗涤→放射自显影或显色反应。

   2）蛋白质的免疫分析

        制备蛋白质样品→与固定基质结合→常温空气中固定→封闭剂封闭→ 一抗反应→洗涤→二抗-酶偶联物反应→洗涤→显色反应（EIA）

        或 → 一抗放射标记物→洗涤→放射自显影（RIA）

  3）双脱氧链终止法测序原理： 通过合成与单链DNA互补的多核苷酸链，由于合成互补链时参入的ddNTP缺乏3’ –羟基，因此不能与下一位核苷酸反应形成磷酸二酯键，DNA合成反应将中止，如此可在不同位置随机终止反应，产生只差一个核苷酸的DNA分子，从而来读取待测DNA分子的顺序。