一、实验目的
(1)学会动物基因组DNA的提取和检测技术;掌握相对分子量圈套的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术;
(2)认识遗传信息的载体DNA;
(3)加深分子遗传学理论的认识和实验基本技能的培养。
二、实验条件
本实验在遗传学实验室完成。遗传学实验室提供实验仪器、用具和试剂,实验室为半开放,学生可以在实验室开放时间做实验。需要购买实验材料时,经指导老师批准,确定数量和价格范围后可以购买,实报实销。
三、实验要求
(1)实验前,学生应查阅参考文献,理解本实验的目的要求,制定出本实验的设计方案,经指导老师可行性分析后,再修改、确定实验方案;
(2)将所有实验用具和试剂准备好之后才能开始实验,操作要严格规范。
(3)根据实验结果写出实验报告,并分析、讨论,得出结论。
四、实验说明
(1)本实验需要综合应用到遗传学、动物学、生物化学等相关知识;
(2)实验原理:真核生物DNA提取的材料来源可以是培养的细胞、血液、肝、脾、肾等组织,主要考虑材料取得的难易和操作是否简便。通常的方法是在有EDTA和SDS等去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞,随后用酚/氯仿/异戊醇抽提,可能得到哺乳动物基因组DNA,用此方法得到的DNA长度为100-150kb。
五、注意事项
EB(溴化乙锭)、酚为剧毒,在操作有毒试剂,必须戴上PE手套,小心操作,防止进入人体。
EB处理:(1)固体溴化乙锭在262℃分解,在标准条件进行焚化后不可能再有危害性;(2)EB溶液中加入足量的水使EB的浓度降到0.5ml/ml以下,再加入1倍体积的0.5mol/l高锰酸钾,小心混匀后再加1倍体积的2.5mol/L盐酸,小心混匀,于室温放置数小时,然后加入1位体积的2.5mol/L氢氧化钠,小心混匀后可丢弃该溶液。