分光光度计的使用

一.  目的
通过电化教学方式学习分光光度计的工作原理
掌握比色测定的基本操作方法
二.  原理
光线的本质是电磁波的一种,有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光,波长范围在400~750nm:小于400nm的光线称为紫外光;大于750nm的光线称为红外光。
当光线通过透明溶液介质时,其辐射的波长有一部分被吸收,一部分透过、因此光线射出溶液之后,部分光波减少,这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。

其中:T:透光率                            A:吸光度(有时用光密度OD表示) 

         I: 透射光强度               I0:入射光强度
         K:吸收系数                   L:溶液的光径长度
         C:溶液的浓度
 
从上式可以看出,一束单色光通过溶液后,光波被吸收一部分,其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比,当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时,吸光度A与溶液的浓度C成正比。
三.  实验材料及设备
1.  仪器
分光光度计  放相机  电视机
2.  器材
普通试管:  20mL×3
移 液 管:  5mL×2
烧    杯:  250mL×1
洗 耳 球:  2
洗瓶、试管架、移液管架:各1 
四.  试剂的配制
重铬酸钾(K2Cr2O7)溶液(0.2mg/mL)
称取0.2g K2Cr2O7,蒸馏水溶解后定容至1000mL。
五.  操作步骤
1.  在电教室中看录像
了解721型分光光度计的工作原理。
2.  在分光光度室中练习操作
详细步骤见附录六。
3.  在实验室中应用练习
取3支试管,按下表所示顺序操作。
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六.  结果处理
1.  求两个样品管A450的平均值200766203949305.gif
2.  计算重铬酸钾的摩尔消光系数。