一. 目的
通过电化教学方式学习分光光度计的工作原理
掌握比色测定的基本操作方法
二. 原理
光线的本质是电磁波的一种,有不同的波长。肉眼可见的彩色光称为可见光,波长范围在400~750nm:小于400nm的光线称为紫外光;大于750nm的光线称为红外光。
当光线通过透明溶液介质时,其辐射的波长有一部分被吸收,一部分透过、因此光线射出溶液之后,部分光波减少,这种光波的吸收和透过可用于某些物质的定性定量分析。
其中:T:透光率 A:吸光度(有时用光密度OD表示)
I: 透射光强度 I0:入射光强度
K:吸收系数 L:溶液的光径长度
C:溶液的浓度
从上式可以看出,一束单色光通过溶液后,光波被吸收一部分,其吸收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比,当入射光、吸收系数K和溶液的光径长度L不变时,吸光度A与溶液的浓度C成正比。
三. 实验材料及设备
1. 仪器
分光光度计 放相机 电视机
2. 器材
普通试管: 20mL×3
移 液 管: 5mL×2
烧 杯: 250mL×1
洗 耳 球: 2
洗瓶、试管架、移液管架:各1
四. 试剂的配制
重铬酸钾(K2Cr2O7)溶液(0.2mg/mL)
称取0.2g K2Cr2O7,蒸馏水溶解后定容至1000mL。
五. 操作步骤
1. 在电教室中看录像
了解721型分光光度计的工作原理。
2. 在分光光度室中练习操作
详细步骤见附录六。
3. 在实验室中应用练习
取3支试管,按下表所示顺序操作。
六. 结果处理
1. 求两个样品管A450的平均值
2. 计算重铬酸钾的摩尔消光系数。