教学目的、要求:
掌握大肠杆菌感受态的制备与质粒载体向寄主的转移操作步骤;
学习重组基因的转移:转染、转化、转导、显微注射和电穿孔;
了解重组体的检测:遗传检测法、物理法、DNA杂交法、DNA-蛋白质法、转译法。
教学重点及难点:
重组基因的转移和遗传检测法,难点是DNA杂交法(Southern blotting 和western blotting)。
课时安排:3学时
主要内容:
重组基因的转移:转染,转化,转导,显微注射和电穿孔
重组体的检测:遗传检测法,物理法,杂交法, DNA-蛋白质法,转译法
带有外源DNA片段的重组分子在体外构成之后,需要导入适当的寄主细胞进行繁殖,才能获得大量的、纯一的重组体分子,这样一种过程习惯上叫作基因的扩增(amplification)。
将外源重组体分子导入受体细胞的途径包括转化(或转染)、转导、显微注射和电穿孔等多种不同的方式。转化和转导主要适用于细菌—类的原核细胞和酵母这样的低等真核细胞,而显微注射和电穿孔则主要应用于高等动植物的真核细胞。